現(xiàn)代藥材鑒別技術(shù)

中藥顯微鑒別技術(shù)_取樣、制片、染色

中藥的顯微鑒定法是利用顯微技術(shù)對中藥進行顯微分析，以確定其品種和質(zhì)量的一種鑒定方法。顯微鑒定主要包括組織鑒定和粉末鑒定，利用顯微鏡來觀察藥材的組織構(gòu)造、細胞形狀及內(nèi)含物的特征、礦物的光學(xué)特性，和用顯微化學(xué)方法，確定細胞壁及細胞內(nèi)含物的性質(zhì)或某些品種有效成分在組織中的分布等，用以鑒別藥材的真?zhèn)闻c純度甚至品質(zhì)。

一、取樣

取樣的代表性直接影響到結(jié)果的判斷準確，因此必須重視取樣的各個環(huán)節(jié)。

（一）對照品

對照品粉末是檢定供試品的參照物，其制備是顯微鑒別的先決條件。有經(jīng)驗者，可自取標本，鑒定后制作，或購買藥材經(jīng)品種基原鑒定。還應(yīng)注意有些藥材的顯微特征受生長年限及環(huán)境的影響，會產(chǎn)生一定的波動，所以對于供試品的產(chǎn)地、采收期、加工方法等也應(yīng)當認真記錄。

（二）供試品

中藥材  原藥材應(yīng)注意基原、產(chǎn)地、規(guī)格的完整性、清潔程度以及有無水跡、霉變或其他物質(zhì)污染等情況，并詳細記錄。

（1）從同批藥材包件中抽取有代表性的檢定用樣品。

（2）對破碎的、粉末狀的或大小在 1cm 以下的藥材，一般藥材 100g-500g；粉末狀藥材25g；貴重藥材5g-10g；個體大的藥材，根據(jù)實際情況抽取代表性的樣品。

（3）將所取有代表性樣品混合均勻，即為總樣品量。

（4）前處理：將供試品撿凈后，用量較小時，可以用乳體或小型電磨粉碎過《中國藥典》6號篩（1.0μm-250μm）備用。

1、中成藥

（1）取樣：從各批號的箱、包、瓶中隨機取樣，記錄好廠家、批號，從各包裝盒中任意取1丸，每批號不得少于3次。各供試品留樣保存，保存期限至少1年。

水丸無包衣時，可直接取2 丸-3 丸，乳缽中研成細粉后，取少量置裁玻片上，滴加規(guī)定的試液，攪拌均勻，使粘結(jié)的細胞、組織分離，再按粉末特征加水合氯醛試液或其他適當試液處理后觀察。

水蜜丸或大蜜丸；可直接用刀片橫向切開取一薄片，或用小鋼鏟取一小塊（約15mg）放置在載玻片上制片觀察。

（1）去包衣：中藥片劑常見包衣為糖衣，隔離層常使用膠漿、糖漿和滑石粉。水丸和糊丸等（掛）衣的材料有滑石、蔗糖、朱砂、雄黃、青黛、百草霜、礞石、赫石等?？捎玫镀瑢聞?nèi)?，簡單的辦法也可將片劑或丸劑斷為兩半，直接取內(nèi)心，粉碎進行觀察。

（2）添加劑：為便于觀察，可對中成藥的制造過程中使用的添加劑做適當?shù)那疤幚怼?/p>

除去水溶性干擾物：將檢品置于蒸餾水中研勻，離心處理，取沉淀物檢查。

除去脂溶性干擾物：將檢品滴加適量氯仿，離心處理，取沉淀揮干氯仿后檢查。

除去淀粉，糊化淀粉的干擾：將檢品滴加蒸餾水研勻，置燒杯中煮沸、冷卻，離心處理，取沉淀檢查。

以上操作中，為防止某些顯微特征的流失，應(yīng)進行留樣觀察。

二、制片

（一）制片

1、載玻片與蓋玻片  載玻片與蓋玻片是影響圖像質(zhì)量的因素之一。因載物臺下的聚光器是按使用一定厚度的載玻片設(shè)計的。首先應(yīng)選擇規(guī)格統(tǒng)一的載玻片（厚0.9mm-1.2mm）與蓋玻片（厚0.12mm-0.17mm）。使用前，將載玻片與蓋玻片用無水乙醇浸泡后，用柔軟的綢布或無纖維人造紙揩擦，至表面潔凈無暇。

2、制片  將供顯微觀察的粉末藥材或樣品置于載玻片上，然后加入適宜的試液1滴，用玻璃棒攪勻，用鑷子將蓋玻片沿一側(cè)輕輕放下，使液體自然展勻即可?？捎脼V紙吸拭溢出的液體或從蓋玻片邊緣補充液體不足的空隙。

（二）制片按使用試劑分類

1、稀碘液制片  主要用于觀察含淀粉粒。

2、斯氏試液制片  試液由醋酸：甘油：水（1：1：1）組成。用于觀察包括淀粉粒在內(nèi)的所有顯微鑒別特征。

3、水合氯醛制片  水合氯醛試液能滲透組織，使皺縮的細胞膨脹并能溶解淀粉粒、蛋白質(zhì)、樹脂、揮發(fā)油和葉綠素等，使細胞組織變得透明而清晰。

4、乙醇裝片  在觀察的切片中有菊糖、粘液、樹膠等時，使用95%以上的乙醇。

（三）制片按保存時間分類

1、臨時制片  封藏介質(zhì)一般為流動性液體，不耐久藏。但制作簡易、適用于一般的顯微觀察及顯微化學(xué)反應(yīng)。

2、半永久性制片  在上述臨時制片周圍，直接使用加拿大樹膠，將蓋玻片周圍封嚴，室溫放置 1 天干燥后，置冰箱內(nèi)，一般可供 10 年以上觀察使用。封藏介質(zhì)還可以選用半固體的甘油明膠。

3、永久性制片  封藏介質(zhì)一般呈固態(tài)，可長期保存，但制作費時，多用于教學(xué)標本。制作方法一般是先將粉末用無水乙醇浸潤，隨后瀝去乙醇，用二甲苯浸潤，再瀝去二甲苯，滴加加拿大樹膠的二甲苯溶液后，自然揮發(fā)干燥固定后即可。

三、染色

為使標本片特征顯著，可根據(jù)細胞壁及細胞內(nèi)含物的性質(zhì)，加入不同染色劑染色。常見的顯微化學(xué)反應(yīng)如下（所有試液的配制方法參見《中國藥典》）。

（一）細胞壁性質(zhì)的檢定

1、木化細胞壁，加間苯三酚試液1 滴-2 滴，稍放置，加鹽酸 1 滴，因木化程序不同，顯粉色、紅色或紫紅色。此操作最好在水合氯醛透化后再進行，其效果較好。

2、木栓化或角質(zhì)化細胞壁，加蘇丹III 試液，稍放置或微熱，呈橘紅色至紅色。

3、纖維素細胞壁  加氯化鋅碘試液，或先加碘試液濕潤后，稍放置，再加硫酸溶液（33-50）顯藍色或紫色。

（二）細胞內(nèi)含物性質(zhì)的檢定

1、淀粉粒  加稀碘試液，呈藍色或紫色。

2、糊粉粒  （1）加碘試液，呈黃棕色。（2）加硝酸汞試液，呈磚紅色（材

料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脫脂后進行）。

3、脂肪油、揮發(fā)油和樹脂（1）加蘇丹 III 試液，呈橘紅色，紅色或紫紅色。（2）加90%乙醇、脂肪油和樹脂不溶解（蓖麻油及巴豆油例外），揮發(fā)油則溶解。

4、菊糖  加10%α-萘酚乙醇溶液，再加80%硫酸1滴-2滴，顯紫紅色并很快溶解。

5、粘液  加釕紅試液，呈紅色。

6、草酸鈣結(jié)晶  （1）加稀醋酸不溶解，加稀鹽酸即溶解但無氣泡發(fā)生。（2）加硫酸（1-2）逐漸溶解。片刻后析出針狀硫酸鈣結(jié)晶。

7、碳酸鈣（鐘乳體），加稀鹽酸溶解，同時有氣泡發(fā)生。

8、硅質(zhì)  加硫酸不溶解。

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